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[整理]原生质体活力的检测方法  

2012-10-27 10:51:00|  分类: 教学疑问 |  标签: |举报 |字号 订阅

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        浙科版选修3P24对原生质体培养进行了一定的阐述, 包括原生质体的获得方法,原生质体培养后的一些应用,开拓了植物细胞工程的应用范围。
        事实上,原生质体培养前需要对其活力进行检测,很多学生认为可以用质壁分离的方法,说明对原生质体不了解。
原生质体(protoplast)是去除细胞壁,由质膜包裹的裸露细胞。由于原生质体失去了细胞壁这一屏障,因而使其具有特殊的优点,可作为一个单细胞系统用于细胞壁再生、膜的透性及离子转运、细胞分裂与分化、细胞器摄入、病毒侵染机理等基础理论的研究。
        纯化的原生质体需经活力测定后方可用于培养。
        检测原生质体活力的最常用的染色方法有荧光素二乙酸(FDA)染色法、酚藏花红染色法,台盼兰染色法和荧光增白剂(CFW)染色法。
        贺辉在检测草木樨原生质体活力时用工作浓度为0.01%的FDA进行染色,在紫外激发下,发黄绿色的为有活力的,不发荧光的为死的原生质体。
        王红霞[20]在检测芦荟原生质体时使用工作浓度为0.01%的酚藏花红进行染色,无生命力的原生质体被染成红色,活的原生质体无色。
        黄静[43]在对烟草原生质体活力检测时发现FDA染色效果较好,比台盼兰染色清晰,并且更适用于不同来源的原生质体,不会受到叶绿体等内含物的干扰。
        此外活力检测方法还有完整细胞膜的排斥Evans蓝染料法,观察胞质环流法检测有活力的代谢,随渗透改变的原生质体体积变化,用氧电极测放氧从而检测代表活力的呼吸代谢,光合作用研究等。
                                           《生物技术通报》 植物原生质体的制备与活力检测研究进展  王莉  姚占军
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